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結(jié)1核病是嚴(yán)重威脅人類健康的傳1染性疾病,每年約有200萬人死于該病,其死1亡率在傳1染性疾病中僅低于艾1滋病,隨著醫(yī)1療診斷技術(shù)的迅猛發(fā)展,結(jié)1核病病理診斷經(jīng)歷了單一形態(tài)學(xué)和聯(lián)合特殊染色,到如今利用分子病理基因檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行準(zhǔn)確診斷的三個(gè)階段。
我科早在全1國建立了系統(tǒng)性結(jié)1核病分子病理診斷技術(shù)的平臺(tái),率1先將分子病理診斷技術(shù)在結(jié)1核病中應(yīng)用并推廣,解決了傳統(tǒng)病理對(duì)菌陰肺結(jié)1核及肺外結(jié)1核病的診斷率低、結(jié)1核病與非結(jié)1核分枝桿1菌病無法鑒別以及耐藥結(jié)1核病無法診斷等難題。同時(shí),我科作為中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)1核病學(xué)分會(huì)金1牌病理培訓(xùn)基地,負(fù)責(zé)組織制定了結(jié)1核病病理診斷規(guī)范、培訓(xùn)了大量的專1業(yè)技術(shù)人員,為形成結(jié)1核病病理學(xué)綜合診治新模式做出了卓1越貢獻(xiàn)!
滴加FITC-TSA:滴加FITC-TSA試劑,避光室溫反應(yīng)5min。后TBST洗3次×10min,PBS洗1次×5min。
DAPI復(fù)染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,沖洗后滴加抗熒光淬滅封片1劑封片。
鏡檢拍照:切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm,發(fā)藍(lán)光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm,發(fā)射波長515-555 nm,發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560,發(fā)射波長590nm,發(fā)紅光。)
在酵母雙雜交系統(tǒng)中,BD與X蛋白融合,AD與Y蛋白融合,如果X、Y之間形成蛋白-蛋白復(fù)合物,AD與BD會(huì)在空間上充分接近,重新構(gòu)成結(jié)構(gòu)域,啟動(dòng)報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。擁有BD質(zhì)粒的酵母可以在某一缺陷培養(yǎng)基上生長,擁有AD質(zhì)粒的酵母菌可以在另一種缺陷培養(yǎng)基上生長,通過接合(mating)或共轉(zhuǎn)化使酵母同時(shí)擁有AD與BD質(zhì)粒。如果BD上的目的蛋白與AD上的誘餌蛋白存在相互作用,這樣的酵母可以在三缺及四缺的培養(yǎng)基上生長,并啟動(dòng)β-半乳糖苷酶基因的轉(zhuǎn)錄。