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動(dòng)物模型設(shè)計(jì)的注意事項(xiàng)

注意模型要盡可能再現(xiàn)所要求的人類疾病

模型時(shí)必須強(qiáng)調(diào)從研究目的出發(fā)，熟悉誘發(fā)條件、宿主特征、疾病表現(xiàn)和發(fā)病機(jī)理，即充分了解所需動(dòng)物模型的全部信息，分析是否能得到預(yù)期的結(jié)果。例如誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化時(shí)，草食類動(dòng)物兔需要的膽固醇劑量比人高得多，而且病變部位并不出現(xiàn)在主動(dòng)脈弓。病理表現(xiàn)為纖維組織和平滑肌為主，可有大量泡沫樣細(xì)胞形成斑塊，這與人類的情況差距較大。因此要求研究者懂得，各種動(dòng)物所需的誘發(fā)劑量、宿主年齡、性別和遺傳性狀等對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，以及動(dòng)物疾病在組織學(xué)、生化學(xué)、病理學(xué)等方面與人類疾病之間的差異。先將動(dòng)物、固定、局部除毛、消毒皮膚，然后估計(jì)好皮膚到的距離，把穿刺針的長(zhǎng)度固定好。要避免選用與人類對(duì)應(yīng)相似性很小的動(dòng)物疾病作為模型材料。為了增加所動(dòng)物疾病模型與人類疾病的相似性，應(yīng)盡量選用各種敏感動(dòng)物與人類疾病相應(yīng)的動(dòng)物模型，可參考相關(guān)文章《各種敏感動(dòng)物與人類相似的疾病模型》。

很多自發(fā)性動(dòng)物模型在研究人類疾病時(shí)具有重要的價(jià)值，如自發(fā)性大鼠，中國(guó)地鼠的自發(fā)性真性，小鼠的各種自發(fā)性，山羊的家族性等。利用這類動(dòng)物疾病模型來研究人類疾病的優(yōu)點(diǎn)，就是疾病的發(fā)生并發(fā)展與人類相應(yīng)的疾病很相似，均是在自然條件下發(fā)生的疾病，其應(yīng)用價(jià)值就很高，但是這類模型來源較困難，不可能大量應(yīng)用。由于誘發(fā)模型和自然產(chǎn)生的疾病模型是有一定差異的，如誘發(fā)的和自發(fā)的對(duì)的敏感性是不相同的，加之有些人類的疾病至今尚不能用人工的方法在動(dòng)物身上誘發(fā)出來，因此，近年來十分重視對(duì)自發(fā)的動(dòng)物疾病模型的開發(fā)，有的學(xué)者甚至對(duì)狗、貓的疾病進(jìn)行大規(guī)模的普查，以發(fā)現(xiàn)自發(fā)性疾病的病例，然后通過遺傳育種，將這種自發(fā)性疾病模型保持下來，并培育成具有特定遺傳性狀的突變系，以供研究。近年來許多動(dòng)物遺傳病的模型就是通過這樣的方法建立的。方法是用剪毛刀在動(dòng)物一側(cè)或背部剪出號(hào)碼，此法編號(hào)清楚可靠，但只適于短期觀察。在這方面小鼠和大鼠的各種自發(fā)性疾病模型開發(fā)和應(yīng)用得。這類模型在遺傳病、代謝病、缺陷病、疾病和等方面的應(yīng)用正日益增多。

1 被動(dòng)吸煙模型

(1)方法 實(shí)驗(yàn)豚鼠(雌雄不限)，將豚鼠置放在封閉的通氣隔離包中，每天暴露在xiang煙煙霧環(huán)境中(10支/次，1次/d，5d/周，連續(xù)1, 3, 6, 12個(gè)月作肺組織病理學(xué)及肺功能檢查)，即可建立模擬人類吸煙引起的動(dòng)物模型。

(2)模型特點(diǎn) 本模型病理表現(xiàn) 為進(jìn)行性肺泡腔擴(kuò)大、肺功能減退，造模12個(gè)月后即使停止給予動(dòng)物煙霧暴露環(huán)境，模型動(dòng)物肺泡腔的病理學(xué)改變?nèi)钥沙蔬M(jìn)行性發(fā)展，不能恢復(fù)正常。模型動(dòng)物出現(xiàn)的百分比、病變輕重程度與吸煙時(shí)間密切相關(guān)；因模型時(shí)間較長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)過程中影響因素較多，模型的穩(wěn)定性相對(duì)較差。5cm的小站臺(tái)上，對(duì)照組大鼠置于直徑15cm的大站臺(tái)上，周圍是水環(huán)境,水深3cm，平臺(tái)在水面以上1cm，于平臺(tái)以上14cm處放籠罩，上面放水和食物。

2 蛋白酶模型

(1)方法 成年大鼠(雌雄不限)，經(jīng)yi醚后仰臥固定頭部及四肢，輕拉鼠舌，壓迫舌腹，在額鏡直視下，趁大鼠呼吸瞬間，迅速將已裝有木瓜蛋白酶溶液連有的細(xì)塑料插管插入達(dá)氣管分叉處，隨后慢慢推入木瓜蛋白酶(2mg/kg體重)溶液，注入溶液體積控制在0.2ml/100g體重或以下。滴完溶液后，可輔助大鼠作各種直立、旋轉(zhuǎn)等動(dòng)作，以便所滴溶液在大鼠肺內(nèi)均勻分布，然后大鼠自由飲水進(jìn)食。例如用一次定量放血法可造成出血，會(huì)si亡，這就符合可重復(fù)性和達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)化要求。

(2)模型特點(diǎn) 大鼠在造模4d后開始出現(xiàn)一系列的漸進(jìn)理變化，肺功能檢查模型大鼠第4日時(shí)的胸腔氣體容積(TGV)值增加65％，而到第8日就不再變化，而造模前后大鼠氣道阻力(Raw)值則變化無顯著性差異。病理組織學(xué)檢查模型大鼠在發(fā)生早期(1周以內(nèi))主要是肺泡上皮細(xì)胞發(fā)生了破壞，而在晚期階段則可見Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞增多，以及肺泡間隔內(nèi)局限性膠原纖維及彈性纖維的聚集。如果是取少量的作檢查，可將胸骨或股骨剪斷，將其斷面的擠在有稀釋液的玻片上，混勻后涂片涼干即可染色檢查。但本模型(犬)在測(cè)定肺功能時(shí)表明，動(dòng)物呼氣流速的下降與靜態(tài)順應(yīng)性的下降不成比例，同時(shí)病理組織學(xué)也證實(shí)動(dòng)物氣道萎縮，氣道病變說明本模型不是單純性的較佳模型。

多樣硬化模型（EAE）

EAE模型可由來自髓鞘的蛋白如髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG))和完全弗氏佐劑(CFA)免yi誘導(dǎo)，mian疫當(dāng)天及兩天后腹腔注she百ri咳毒su(PTX)而構(gòu)建。髓磷脂特異性T細(xì)胞在外周被ji活，穿過血腦屏障進(jìn)入zhong樞神經(jīng)系統(tǒng)并被重新ji活，引發(fā)一系列yan癥反應(yīng)，導(dǎo)致脫髓鞘和軸突細(xì)胞凋亡，zui終導(dǎo)致神經(jīng)損傷和失去功能。使用標(biāo)準(zhǔn)化評(píng)分系統(tǒng)評(píng)估臨床癥狀，衡量疾病的誘導(dǎo)發(fā)生程度。大鼠的胰管與膽管匯集于一個(gè)總管，在其入腸處插管固定，并在近肝門處結(jié)扎和另行插管，可分別收集到胰液和膽汁。病理組織染色切片 可見局部脫髓鞘和炎性白細(xì)胞浸潤(rùn)。百奧賽圖利用自主開發(fā)制備的B-h17A人源化小鼠（敲除小鼠IL-17A基因，同時(shí)敲進(jìn)人IL-17A基因）為針對(duì)人IL-17A靶點(diǎn)的MSzhi療yao效研究提供了一個(gè)可靠的MOG誘導(dǎo)的EAE模型。