大腸實驗步驟(—)培養(yǎng)基1、普通乳糖蛋白胨培養(yǎng)液亞硫酸鈉培養(yǎng)基（供平板分離用）蛋白胨 10g， 乳糖 10g，K2HPO4 3.5g，瓊脂 15～20g，蒸餾水1000mL，無水亞硫酸鈉 5g，5％的堿性品紅乙醇溶液 20mL，pH 7.2~7.4。4、培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）（供發(fā)酵法平板分離用，3和4可任選一種）蛋白胨10g，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，2％伊紅（曙紅）水溶液 20mL，5％美藍(lán)（亞甲藍(lán)）水溶液13mL，pH 7.2~7.4。(二)滅菌移液管、滅菌稀釋水、試管、杜漢氏小管、革蘭氏染色液、滅菌培養(yǎng)皿。(一)水樣的采集供細(xì)菌學(xué)檢驗的水樣，必須按一般無菌操作的基本要求采集，并保證再運送、貯存過程中不受污染。水樣從采集到檢驗不應(yīng)超過4h ，在0～4℃下保存不應(yīng)超過24h ，如不能在4h 內(nèi)分析，應(yīng)在檢驗報告上注明保存時間和條件。1、自來水取樣：應(yīng)在水打開放水5min ，再用無菌容器接取水樣，待分析。如水樣內(nèi)含有余氯，則采樣瓶滅菌后按每500mL水樣加3％Na2S2O3.5H2O溶液1mL。2、江、河、湖、池自然水體取樣：可用采樣器，采樣瓶應(yīng)先滅菌。采樣后，瓶內(nèi)應(yīng)留有空隙。如果與其他化驗項目聯(lián)合取樣，細(xì)菌學(xué)分析水樣應(yīng)采在其他樣品之前。

糞大腸菌群快速檢測 （酶底物法）

1.適用范圍

本方法適用于生活飲用水及其水源水、地表水、污水、廢水等水中糞大腸菌群（耐熱大腸菌群）的定性檢測、定量檢測

2.方法原理

固定底物酶底物法（DST）采用大腸菌群細(xì)菌能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶分解ONPG使培養(yǎng)液呈黃色的原理，來判斷水樣中是否含糞大腸菌群（耐熱大腸菌群），糞大腸的培養(yǎng)溫度是44.5℃。

3.儀器設(shè)備

3.1 程控定量封口機

3.2電熱恒溫培養(yǎng)箱

3.3 冰箱

3.4 51孔定量盤、97孔定量盤

3.5 100ml無菌水樣瓶

3.6 高壓蒸汽滅菌鍋

3.7 干熱滅菌器

3.8 量筒

3.9 吸管

3.10 試管

培養(yǎng)基和試劑1 （固定底物技術(shù)酶底物法）檢測試劑：MMO-MUG培養(yǎng)基2 無菌水樣品的采集和保存1采樣前準(zhǔn)備：1.1 采樣瓶：滅菌100毫升消毒帶刻度容器。2 樣品采樣及注意事項2.1將已滅菌和封包好的采樣瓶，無論在什么條件下采樣時，均要小心開啟包封紙和瓶蓋，避免瓶蓋及瓶子頸部受雜菌污染，并注意在使用船只或附帶的采樣繩等附加設(shè)備采樣時可能造成的污染。2.2 在采集江、河、湖、庫、地表水樣時，可握住瓶子底部直接將采樣瓶插入水中，約距水面10~15厘米處，瓶口朝來水方向，使水樣灌入瓶內(nèi)。如果沒有水流，可握住瓶子水平前推，直至充滿水樣為止。采好樣后，迅速蓋上瓶蓋和包裝紙。采樣后，采樣瓶內(nèi)上部應(yīng)留有一些空隙，以便檢驗前充分混勻水樣。2.3 用采樣器采樣時，將無菌的水樣瓶放入架內(nèi)。將采樣裝置放入水中。到達(dá)預(yù)定深度后，打開瓶塞，待水樣灌好后，松開瓶塞的軟繩，蓋上瓶蓋。再將整個裝置提出水面。2.4 從自來水采集樣品時，不要選用漏水的，采水前可先將水用酒精燈火焰灼燒滅菌或用70%的酒精溶液消毒水及采樣瓶口，然后將水完全打開，放水?dāng)?shù)分鐘后除去水管中的滯留雜質(zhì)。采水時控制水流速度小心接入瓶內(nèi)。2.5在同一采樣點進(jìn)行分層采樣時，應(yīng)自上向下進(jìn)行，以免不同層次的攪擾；2.6采樣完畢，應(yīng)將采樣瓶編號、作好采樣記錄。將記錄下采樣條件，填入采樣表格內(nèi)。2.7 樣品的運輸和保存采好的水樣，應(yīng)迅速運往實驗室，進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗，一般從取樣到檢驗不宜超過2小時，不然應(yīng)使用10℃以下的冷藏設(shè)備保存樣品，但不得超過6小時，實驗室接到送檢樣后，應(yīng)將樣品立即放入冰箱，并在2小時內(nèi)著手檢驗。3 樣品交接樣品運回實驗室后，由采樣人員與質(zhì)管科樣品管理人員進(jìn)行交接。4干擾與消除：防止操作過程中的污染，嚴(yán)格無菌操作。