藥xiao學實驗-減肥功能的動物試驗評價方法

1 測試項目

1.1 原理

這種方法是用高熱量食物誘導動物肥胖，然后給試驗樣品（肥胖模型），或者同時給高熱量食物給試驗樣品（肥胖預防模型），觀察其變化動物體重和體脂含量。

1.2 肥胖模型法

SPF級雄性大鼠，體重180-220g，8-12只/組。在屏障系統下，給大鼠喂養維持飼料并觀察5-7天。按體重隨機分為兩組，10只給予維持飼料作為空白對照組，60只給予高熱量模型飼料。每周記錄喂食量、灑食量、剩食量，稱體重1次。喂養2周后，將給予高熱量飼料的60只大鼠按體重增加進行排序，剔除1/3體重增加較低的抗肥胖大鼠。選取40只肥胖敏感大鼠給予高熱量飼料6周，空白對照組同時給予維持飼料。

一、主要試劑材料

細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)（Solarbio，G0170）

DMEM（Hyclone，SH30023）

FBS（Hyclone，SH30070.03）

青鏈mei素（Hyclone，SV30010）

胰酶（Hyclone，SH30042.01）

PBS（南京生興，SN331）

CO2培養箱（Thermo fisher，3131）

Confocal熒光顯微鏡（Zeiss，LSM710）

二、實驗方案

1、MG63及其耐藥株培養在含10%胎牛xue清的DMEM完全培養基中培養，培養在37℃含5%CO2的細胞培養箱中培養，當細胞增殖至80%-90%時，用胰酶將細胞消化下來，按照1:3比例傳代。

2、將1×106個細胞種在3.5cm玻璃底培養皿中，將細胞放入培養箱中培養過夜后，分別加入miR-22、cisp1atin、cisp1atin和miR-22后，將細胞放入培養箱中培養12h、24h。3、將細胞從培養箱中取出，去除培養基，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次，棄上清。4、加入適量MDC Stain，輕輕混勻。5、室溫避光染色15～45min。6、用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞2次，棄上清。7、加入100μl的Collection buffer重懸細胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。8、熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長355nm，阻斷濾光片波長512nm)，拍照。

膀guang炎：

大部分情況下，膀guang炎由細菌感ran所致，膀胱感ran可能引起疼痛并令人煩惱。如果感ran擴散至shen臟，可能發展為嚴重的健康問題。

膀guang炎還可能作為對某些yao物或放she療法的反應出現。某些因素有時會刺激膀胱，例如衛生產品、sha精凝膠或長期使用導管，這也可能引發膀guang炎。膀guang炎還可能作為另一種疾病的并fa癥出現。

實驗材料

C57BL/6小鼠

1-2x108cfu/ml大腸桿jun懸液

24G留置針

注she器

10%水合氯醛

1、小鼠稱量體重后按照重量使用10%水合氯醛進行ma醉。

2、ma醉后的小鼠用膠布固定于板上

3、觸摸小鼠下腹部，摸到鼓包時確定小鼠膀胱所在位置，輕柔按壓膀胱，排空尿液。

4、使用碘酊消毒niao道口，使用合適的留置針潤滑后從niao道外口插入膀胱。

實驗案例

給藥24小時后，形態學可見大量炎性細胞浸潤

組織水腫，膀胱上皮脫落。