8分鐘前 水稻RNA原位雜交測試服務信息推薦「科銳諾」[科銳諾44070b2]內(nèi)容：

原理

原位雜交技術(shù)是在一定的溫度和離子濃度下，使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補規(guī)則與組織細胞內(nèi)待測的核酸復性結(jié)合而使得組織細胞中的特異性核酸得到定位，并通過探針上所標記的檢測系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。

經(jīng)特定標記的核苷酸鏈為探針，可與組織切片、細胞或染色體標本中的待檢DNA片段或mRNA進行雜交，然后顯示標記物，從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項技術(shù)可研究各種基因在染色體上的定位，編碼某種蛋白質(zhì)的mRNA在胞質(zhì)中的表達。

原位雜交試驗

收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養(yǎng)，到達所需要的發(fā)育時期時，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時后用50%2%多聚甲醛溶液洗，然后換成，在-20C 保存，待用（兩天和兩天以上的胚胎需要用處理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養(yǎng)，可阻斷色素的形成） 武漢科銳諾生物科技有限公司

PCR技術(shù)是一種在生物體細胞外通過酶促合成特異DNA或DNA片段的方法。其原理是設計特異引物，在TaqDNA聚合酶催化作用下，經(jīng)過高溫變性、低溫退火和適溫延伸3個步驟反復循環(huán)，對某一特定模板的特定區(qū)域進行擴增，反應結(jié)束后應用凝膠電泳或測序等方法分析產(chǎn)物。因此，該技術(shù)可以直接檢測疾病組織、細胞中是否存在某種病毒DNA，同時PCR技術(shù)還是基因突變檢測的前期必備技術(shù)。

阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：滴加3%1甲1醇-H2O2，室溫避光孵育15min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

預雜交：滴加預雜交液，37°C孵育1h。

雜交：傾去預雜交液，滴加含探針has-circ-ST6GALNAC6 probe 雜交液，濃度6ng/ul，恒溫箱37度雜交過夜。

雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌。

滴加封閉液：滴加封閉血1清（正常兔血1清），室溫30min。

滴加鼠抗地1高辛標記過氧化物酶（anti-DIG-HRP）：傾去封閉液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min，后PBS洗3次×5min。